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光谱流式应用(二)|组织自发荧光

发布时间:2018-08-06 15:44 |  点击次数:

 

流式检测器脏组织样本的难点

 

流式细胞仪的诞生最初应用于分析表达于造血细胞表面的蛋白分子,经过流式技术的发展目前已经广泛应用于不同组织和器官来源的细胞鉴定;但是由于多参数检测需要复杂繁琐的计算补偿矩阵,以及来源组织器官的细胞样本经常产生大量自发荧光,对数据分析的真实可靠性造成了极大的困难。

下图显示了不同器脏组织(小肠,肝脏,肾脏,心脏)的自发荧光强烈干扰染料荧光的分析(常常称其为火箭峰);在索尼全光谱流式细胞系统上可将自发荧光从染料荧光中分离出来,去除自发荧光带来的干扰,提高检测结果的真实可靠性(见下图)

 

对比不同流式细胞仪的检测结果

 

文章提到了,肠道上皮细胞层中能发现一些T淋巴细胞亚群。传统分离淋巴细胞的过程复杂,费时费力,而且会丢失很多细胞;为了提高计量的准确性,优化实验方案,文章采用索尼全光谱流式细胞仪对肠道组织制备的样本中T淋巴细胞分型鉴定。

本文对比了传统滤光片式流式细胞仪和索尼全光谱流式细胞仪的检测结果。结果显示在传统流式和全光谱流式都能明显检测到细胞自发荧光;红色箭头(下图第一行)指示了细胞群体之间的分辨率较差的结果;同时B和C两台传统流式不能很好区分CD3+T淋巴细胞亚型(下图第二行);同样在Vγ7检测中也受到自发荧光的干扰;而且TCRβ-细胞(下图第四行)严重干扰了CD3+TcRγδ-细胞,因为从生物学角度TCRβ-细胞不会出现在来源上表皮细胞的淋巴细胞中(见下图)。进一步,作者对比了解析自发荧光之后的结果显示(SP6800AF),各种T淋巴细胞受到自发荧光的干扰被去除,而且CD3+TcRγδ-细胞也没有受到来自TCRβ-细胞的干扰。

 

多种组织样本结果的验证

 

除了肠道组织样本外,本文还测试了胚胎心脏组织。文章先通过CD45-Ter119-去除循环造血细胞,然后分析CD31(内皮细胞)和Sca-1。结果显示在传统流式中出现了明显的自发荧光细胞群(见下图黑色箭头指示),相比在索尼全光谱流式细胞仪上看不到自发荧光细胞群的干扰(见下图橙色箭头指示)。

本文为了进一步说明上图结果来源于心肌细胞,而不是内皮细胞或者造血细胞低表达CD45,Ter119或CD31。下图显示了取材的样本高表达心肌标志物TNNT2和MYL-2,而在CD31+内皮细胞中不表达(见下图)。

本文详细阐述了索尼全光谱流式技术能够极大去除自发荧光的干扰,提高检测结果的准确可靠性,从方法学上解决自发荧光的流式技术,各类组织和器官来源复杂的样本再也不用发愁啦!

 

 

索尼全光谱流式简介

  

SP6800作为全球首款商业化全光谱流式细胞仪,结合索尼各项专利技术,一经推出就包揽世界各项工业设计大奖,其中就有工业奥斯卡奖之称的德国红点设计大奖,并深得全球用户喜爱!SP6800秉承了索尼传统工业美学设计,精益求精的工匠精神,低调有内涵的黑科技加持,助力生命科学研究新发现!

 

 

 

参考文献:  Sandrine Schmutz, Mariana Valente, Ana Cumano, Sophie Novault. Spectral Cytometry Has Unique Properties Allowing Multicolor Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues. PLoS ONE 11(8): e0159961. doi:10.1371/journal.pone.0159961.

 

 

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