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流式解惑系列｜同型对照知多少
人阅读 发布时间：2018-11-16 10:31
小师妹：
师兄，我的流式又失败了。。同型对照的表达比实验组的表达还要高！嘤嘤嘤
大师兄：
首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象。所以说哦，要找到一个正确的同型对照，比你找到一个男朋友可能还要难~
小师妹：
那这到底肿么破？师兄帮帮我~~~请你吃大餐！
大师兄：
师兄哪是为了一顿饭呀~~来，我给你讲讲同型那些事儿！
师兄，我的流式又失败了。。同型对照的表达比实验组的表达还要高！嘤嘤嘤
大师兄：
首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象。所以说哦，要找到一个正确的同型对照，比你找到一个男朋友可能还要难~
小师妹：
那这到底肿么破？师兄帮帮我~~~请你吃大餐！
大师兄：
师兄哪是为了一顿饭呀~~来，我给你讲讲同型那些事儿！
开 ~ 讲 ~ 啦
同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。
要想选择合适的同型对照，跟着我来三步走
- 一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体
- 如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。
- 如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。
考考你，假如要检测抗 CD69-PE 的荧光信号，怎么设置它的同型对照呢？
当当当~~~揭晓答案 ☟
抗 CD69-PE 的同型是与抗 CD69 抗体同种属（来源于同一物种）且同类（抗 CD69-PE 中的抗体是 IgG1 类的）非特异性抗体（IgG1）与 PE 荧光素偶连的同型对照抗体（即 IgG1-PE）。检测得到的荧光信号示意图如下：
小师妹：
原来同型对照是这样子的，那师兄，每次实验都必须做同型对照吗？
大师兄：
那倒不是。做胞内流式，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等；或者使用不常见的标志或者特异性不高的标志的时候，可以根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。所以如果你是做常用的表面标志或者对流式很熟悉，一般可以不用同型对照啦~
小师妹：
师兄，你「拯救」了我啊！师兄万岁！
愿我们的努力为您的实验增添一份助力！
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